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小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-說明書

小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-說明書

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小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-說明書 詳細資料

操作流程:
小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-說明書主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-43),co2孵箱(日本yamato it-6)。
.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
.2. 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~0倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以×05/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%消化~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用0×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×04。
.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生的細胞,以0.25%消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于2個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×00%,計算貼壁率。 
.6 生長曲線 取指數(shù)生的細胞用消化制成單細胞懸液,以×04/孔接種于24孔板,每孔加入ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)0d,繪制細胞生長曲線

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細胞名稱 小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-說明書
形態(tài)特性 上皮樣

生長特性 貼壁生長

特征特性 該細胞源于tg(SV40E)Bri7轉基因小鼠的正常腎組織,含SV40病毒的DNA序列,保留了皮質集合管的某些特性,如形態(tài)和CCD(皮質結合管)抗原。大多M-細胞的克隆具有皮質集合管中閏細胞或主細胞的特征;5%~0%的細胞有閏細胞和主細胞的雙重表型。當該細胞在滲透性支持物上生長時,可形成具有負跨膜電位差的腔樣結構。

培養(yǎng)條件 DMEM/F2(:): Ham's F2/DME Medium (DME H-6/F-2 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 0%FBS

傳代方法 :3~:4傳代;每周換液2~3次。

傳代情況 C4

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測 培養(yǎng)法(-)

STR -

同工酶

染色體

主要功能:
()小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-說明書血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
(2)表達鈣通道及ICAM-和VCAM-,參與血管壁的炎癥反應。
(3)與血管疾病的進展和穩(wěn)定有關。
 生理變化:
()主動脈硬化。
(2)主動脈瘤
(3)主動脈鈣化。
基本特性:
()小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-說明書組織來源于正常大鼠大動脈組織。
(2)鑒定:肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。
(3)原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)每凍存管細胞數(shù):>5×05 cells/ml。
(5)肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗證。
(6)不含有HIV-、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

運輸和保存:
小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-說明書視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
)mL凍存細胞懸液裝于.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存?zhèn)€月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
具體操作:
.預熱培養(yǎng)用液:把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱。
2.用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。
3.正確擺放使用的器械:保證足夠的*作空間,不僅便于*作而且可減少污染。
4.點燃酒精燈:注意火焰不能太小。
5.準備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶,放入微波爐內高火,8分鐘再次消毒。
6.取出預熱好的培養(yǎng)用液:大鼠主動脈平滑肌細胞取出已經(jīng)預熱好的培養(yǎng)用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內。
7.從培養(yǎng)箱內取出細胞:注意取出細胞時要旋緊瓶蓋,用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面,再在鏡下觀察細胞。
8.打開瓶口:將各瓶口一一打開,同時要在酒精燈上燒口消毒。?

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小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-說明書Bile salt-activated lipase  膽鹽激活脂肪酶抗體 規(guī)格: 0.2ml

PIWIL3  piwi樣3蛋白抗體 規(guī)格: 0.ml

Rab7  RAS基因相關蛋白RAB7抗體 規(guī)格: 0.2ml

p53BP/53BP  p53結合蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSmad4  Smad4抗體 規(guī)格: 0.ml

DOG-/TMEM6A  跨膜蛋白6A/鈣激活氯離子通道抗體 規(guī)格: 0.ml

Rabbit Anti-Monkey IgG/FITC  FITC標記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.3ml

CCDC47  卷曲螺旋結構域蛋白47抗體 規(guī)格: 0.2ml

ANKRD22  錨蛋白重復結構域蛋白22抗體 規(guī)格: 0.2ml

CPT2  肉毒堿棕櫚酰基轉移酶2抗體 規(guī)格: 0.2ml

TGF Beta R3  轉移生因子β受體3抗體(TGF-βRⅢ) 規(guī)格: 0.mlPLEKHM3  小板白細胞C激酶底物同源結構域M3抗體 規(guī)格: 0.2ml

STAT4  信號轉導和轉錄激活因子4抗體 規(guī)格: 0.ml

 

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