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PCR產物純化之試劑盒回收操作流程
點擊次數:1599 更新時間:2020-04-16

PCR產物純化之試劑盒回收操作流程如下:

. 取SunShinecleanTM DNA Mini Column 柱裝于2 ml 收集管上(已備)。加入500 μl Buffer B 平衡液至柱子內,室溫下0,000 rpm 離心 min,使平衡液*流過柱子。棄去收集管中的平衡液,重新將DNA Mini Column柱裝于該收集管上。

2. 將需要純化的DNA(少于00 ul)置于干凈的.5 ml的EP管內,加入300-500 ul Buffer K,充分混勻。

(注:一些PCR產物可能含有石蠟油,石蠟油可能會導致回收率降低。因此我們建議將石蠟油盡量清除。)

3. 將混合液轉移到一步已經平衡的柱子里面,室溫放置2 min,0,000 rpm離心 min。

4. 棄去收集管中的濾液,將柱子裝回2 ml收集管內,加入700 μl Buffer W(已用70%乙醇溶解的)至柱子中。室溫下0,000 rpm離心 min。

(注:濃縮的Buffer W在使用之前請用70%乙醇溶解。)

5. 重復步驟4一次。

6. 棄去收集管中的濾液,將柱子裝回2 ml收集管內。室溫下,2,000 rpm離心2 min以甩干柱子基質殘余的液體。

(注:省去這一步將導致殘留乙醇于DNA中。)

7. 把柱子裝在一個干凈的.5 ml離心管上,加入0-50 μl(具體取決于預期的終產物濃度)Buffer E(可用超純水或TE緩沖液代替)到柱基質的膜,室溫放置0.5- min,2,000 rpm離心 min以洗脫DNA。di一次洗脫可以洗出80%以上的結合DNA。如果再洗脫一次的話,可以把殘余的DNA洗脫出來。

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