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技術(shù)文章

沉淀反應(yīng)技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù):1231 更新時(shí)間:2016-02-17

一、 概述

    可溶性抗原(如細(xì)菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他來源的蛋白質(zhì)、多糖質(zhì)、類脂體等)與其相應(yīng)的抗體相遇后,在電解質(zhì)參與下,抗原抗體結(jié)合形成白色絮狀沉淀,出現(xiàn)白色沉淀線,此種現(xiàn)象稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)中的抗原叫沉淀原(precipitinogen),與沉淀原發(fā)生反應(yīng)的抗體稱為沉淀素(precipitin)。沉淀反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制與凝集反應(yīng)基本相同。不同之點(diǎn)是:沉淀原分子小,單位體積內(nèi)總面積大,故在定量試驗(yàn)時(shí),通常稀釋抗原。

    沉淀反應(yīng)主要包括有環(huán)狀沉淀反應(yīng)、絮狀沉淀反應(yīng)和瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)。

    環(huán)狀沉淀反應(yīng)是zui早的沉淀反應(yīng),目前在鏈球菌的分類、鑒定,昆蟲吸血性能及所吸血液來自何種動(dòng)物的鑒別,肉品種屬鑒定及炭疽尸體與皮張的檢驗(yàn)工作中仍然應(yīng)用。主要是用已知的抗體診斷未知的抗原。

    絮狀沉淀反應(yīng)是將抗原與血清在試管內(nèi)混合,在電解質(zhì)存在的情況下,抗原抗體復(fù)合物可形成混濁沉淀或絮狀沉淀凝聚物,此法通常用于毒素與抗毒素的滴定。

    瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散(Agar-gel immunodiffusion)是沉淀反應(yīng)的一種形式,是指抗原抗體在瓊脂凝膠內(nèi)擴(kuò)散,特異性的抗原抗體相遇后,在凝膠內(nèi)的電解質(zhì)參與下發(fā)生沉淀,形成可見的沉淀線。這種反應(yīng)簡(jiǎn)稱瓊脂擴(kuò)散。

    抗原抗體擴(kuò)散使用的凝膠種類很多,除瓊脂外還有明膠、果膠、聚丙烯酰胺等,因此總的名稱叫免疫擴(kuò)散(Immunodiffusion 簡(jiǎn)寫為ID)。瓊脂擴(kuò)散是免疫擴(kuò)散中的一種方法。

    瓊脂擴(kuò)散的原理是:物質(zhì)自由運(yùn)動(dòng)形成擴(kuò)散現(xiàn)象,擴(kuò)散可以在各種介質(zhì)中進(jìn)行。我們所使用的%~2%的瓊脂凝膠,瓊脂形成網(wǎng)狀構(gòu)架,空隙中是 98%~99%的水,擴(kuò)散就在此水中進(jìn)行。%~2%瓊脂所形成的構(gòu)架網(wǎng)孔較大,允許分子量在20萬以下甚至更大些的大分子物質(zhì)通過,絕大多數(shù)可溶性抗原和抗體的分子量在20萬以下,因此可以在瓊脂凝膠中自由擴(kuò)散,所受阻力甚小。二者在瓊脂凝膠中相遇,在zui適比例處發(fā)生沉淀,此沉淀物因顆粒較大而不擴(kuò)散,故形成沉淀帶。

    一種抗原抗體系統(tǒng)只出現(xiàn)一條沉淀帶,復(fù)合物抗原中的多種抗原抗體系統(tǒng)均可根據(jù)自己的濃度、擴(kuò)散系數(shù)、zui適比等因素形成自己的沉淀帶。本法的主要優(yōu)點(diǎn)是能將復(fù)合的抗原成分加以區(qū)分,根據(jù)沉淀帶出現(xiàn)的數(shù)目、位置以及相鄰二條沉淀帶之間的融合、交叉、分枝等情況,就可了解該復(fù)合抗原的組成。

二、環(huán)狀沉淀反應(yīng)

    以炭疽環(huán)狀沉淀反應(yīng)為例,此反應(yīng)又稱Ascoli氏反應(yīng)。

(一)材料與試劑

.已知炭疽沉淀血清,購買自生物制品所。

2.待測(cè)炭疽沉淀抗原

3.試管5mm×50mm、滴管

4.0.3%石炭酸生理鹽水

(二)操作方法

.待測(cè)抗原的提取

()取可疑為炭疽而死的病畜的實(shí)質(zhì)臟器g,放入試管或小三角燒瓶中,加生理鹽水5ml~0ml,煮沸30min~40min,冷卻后用濾紙過濾得清澈的液體,即為待測(cè)抗原。

(2)如病料是皮張,可采用冷浸法。將樣品高壓滅活后,剪成小塊并稱重,加約5倍的0.5%生理鹽水,室溫浸泡8h~24小時(shí),濾紙過濾,即為待檢抗原。抗體

 

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